Evaluation de la vitrification des spermatozoïdes sur la protéine phospholipase C Zeta

Oancea, Valerica-Gabriela (2021) Evaluation de la vitrification des spermatozoïdes sur la protéine phospholipase C Zeta. Thèse d'exercice en Thèses > Biologie médicale, Université Toulouse III - Paul Sabatier.

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Résumé en français

Introduction : le rôle fondamental de la protéine PLC Zeta dans l'activation ovocytaire et le développement embryonnaire est démontré depuis 2002 (33), (34). Précédemment Moreau et al(43). ont prouvé un impact négatif de la congélation lente sur la présence de cette protéine. L'objectif de ce travail de thèse a été d'évaluer PLC Zeta après vitrification, technique de congélation alternative à la congélation classique, ayant déjà prouvé son efficacité et son innocuité puisque des naissances d'enfants en bonne santé conçus avec des spermatozoïdes vitrifiés ont été décrites (68) (69) (72). Matériel et méthodes : 20 patients ont été inclus durant la période de mai à juillet 2021 au CECOS du CHU de Toulouse après obtention d'un consentement de recherche écrit. Parmi les 20 patients, 18 ont présenté des paramètres spermatiques normaux d'après la 5ème édition du manuel de l'OMS (9) et 1 patient était asthénosperme et 1 autre présentait une oligospermie légère. L'analyse de PLC Zeta a été réalisée selon les protocoles de Yelumalai et al. (2015) et Grasa et al. (2008). Le critère principal de cette étude est le pourcentage de spermatozoïdes exprimant la protéine PLC Zeta après décongélation et dévitrification en système fermé (44), en système ouvert (31) et en système fermé selon (44) modifié. Les patterns de localisation de la PLC Zeta ont également été évalués. L'analyse des lames a été faite en double lecture, en simple aveugle. Le test Wilcoxon apparié a été utilisé pour faire l'analyse statistique. Résultats : la proportion de spermatozoïdes exprimant PLC Zeta n'est statistiquement pas différente entre les 5 groupes (frais, congélation lente, vitrification en système fermé, en système ouvert et fermé modifié, respectivement 53%, 51%, 52%,51%, 51%, p<0,05). Discussion : Ces résultats sont, à notre connaissance, les premiers concernant l'impact de la vitrification sur PLC Zeta. Malgré l'utilisation du même protocole, nos résultats sont discordants de ce retrouvés en 2019 (Moreau et al.). Parmi les limites de notre étude on cite : la période courte d'inclusion, la cohorte relativement petite, l'analyse quantitative en microscopie en fluorescence à l'aide des anticorps polyclonaux, donc moins spécifiques que ceux monoclonaux. Conclusion : les études sur la PLC Zeta doivent être poursuivies, ainsi que celles concernant l'amélioration de la technique de vitrification, afin d'optimiser la prise charge des couples, tout en respectant les normes de sécurité sanitaire.

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